Protocolul de diagnostic a sclerozei multiple- determinarea benzilor oligoclonale in LCR cu kit-ul Hydragel CSF

Document creat de: Andreea CHIVA

Programul SEBIA de investigare a proteinelor din LCR utilizeaza 2 kit-uri :

-Hydragel CSF sau CSF Isofocusing pentru determinarea benzilor oligoclonale in LCR (criteriu de diagnostic pentru scleroza multipla)

-Hydragel HR (High Resolution)- pentru diagnosticul unor afectiuni, altele decat scleroza multipla. Kitul poate determina cantitativ unele proteine specifice LCR (fractiunea Tau, transtiretina, cistatina).

Anatomie si fiziologie... cateva notiuni

-          proteinele din LCR provin din ser (prin ultrafiltrare la nivelul barierei hemato-encefalice) sau prin sinteza intratecala

-          volumul LCR: 140 ± 30 ml

-          concentratia proteinelor totale : 0.30 ± 0.15 g/l

-          functii: protectia mecanica a sistemului nervos si eliminarea produsilor rezultati in urma metabolismului (mentinerea homeostaziei)

Variatiile patologice la nivelul proteinelor din LCR pot apare ca rezultat al:

-          transudarii- cresterea permeabilitatii barierei hemato-encefalice ce are ca rezultat scaderea concentratiei proteinelor specifice LCR (transtiretina, fractiunea Tau) prin dilutie cu proteinele din ser

-          sintezei intratecale – manifestata prin cresterea concentratiei transtiretinei, a fractiunii Tau si a cistatinei, precum si sinteza intratecala de Ig (in special Ig G)

-          combinatiei celor doua procese

Transudarea apare in:

-compresiuni medulare

-accident cerebro-vascular

Sinteza intratecala apare in:

                                                                                                    Frecventa

–         Scleroza multipla                                      >95 %

–        Meningita cronica                                       >95 %

–        Panencefalita sclerozanta subacuta      100 %

–         Sifilis nervos netratat                               >95 %

–        Infectie HIV                                                    80 %

–        Neuro borelioza Lyme                               100 %

–        Cisticercoza  cerebrala                             100 %

–        Lupus eritematos neurosistemic           50 %

–        Neuro - sarcoidoza                                    40 %

–        Neuro - Behcet                                           50 %

–        Sindrom paraneoplaziic                            60 %

–        Tumori SNC: germinoma                        < 5%                      

PROTOCOLUL DE DIAGNOSTIC AL SCLEROZEI MULTIPLE -DETERMINAREA BENZILOR OLIGOCLONALE IN LCR

Cuprinde obligatoriu parcurgerea a trei etape (determinarea cantitativa a albuminei si a Ig G in ser si LCR, calculul indecsilor specifici si identificarea electroforetica a benzilor oligoclonale in LCR) si coroborarea rezultatelor obtinute.

1. Determinarea cantitativa a albumiei (marker de transudare) si a Ig G (marker al sintezei intratecale) in ser si LCR (obligatorie).

Serveste pentru stabilirea dilutiilor de ser si LCR necesare electroforezei si pentru determinarea indecsilor. Se utilizeaza tehnici imunonefelometrice si imunoturbidimetrice.

2.Calculul indecsilor

 Index albuminic = Alb LCR/Alb ser x 100

Valori normale < 0.65 dependent de varsta

Creste in modificarea permeabilitatii barierei hematoencefalice

Index Ig G= Ig G LCR/ Ig G ser  

                        Alb LCR/ Alb ser

Valori normale < 0.65

Creste in sinteza intratecala

3. Identificarea benzilor oligoclonale in LCR prin electroforeza utilizand kit-ul Hydragel CSF sau CSF Isofocusing SEBIA

Hydragel CSF combina electroforeza de inalta rezolutie a proteinelor LCR cu imunofixarea cu anticorpi de inalta specificitate anti Ig G

Hydragel CSF Isofocusing  are la baza identificarea sintezei intratecale de Ig G pe baza migrarii intr-un gradient linear de pH generat de un amfolit. Proteinele vor migra catre electrodul de semn opus, iar la punctul izoelectric (unde sarcina globala a moleculei este 0) proteinele vor precipita si se vor fixa in gel.

IMPORTANT!

1. In unele situatii patologice, sinteza intatecala de Ig G nu conduce la modificarea indecsului Ig G. De aceea, electroforeza este singura analiza ce poate surprinde modificarile calitative ale proteinelor si unul dintre cele mai importante criterii de diagnostic.
2. Cresterea concentratiei de Ig A si M  este nespecifica pentru scleroza multipla (sinteza intratecala), ea aparand in caz de infectii bacteriene la nivelul sistemului nervos sau in unele boli autoimune.