Ce alegem: electroforeza in gel sau electroforeza capilara?
Document creat de Andreea CHIVA
Tehnicile electroforetice prezinta un interes clinic deosebit fiind folosite cu succes in screening-ul, diagnosticul si monitorizarea unei game largi de afectiuni:
- raspuns inflamator
- malnutritie
- afectiuni renale
- afectiuni hepatice
- gamapatii monoclonale
- talasemii
Scopul utilizarii acestei metode de analiza este multiplu:
- identificarea anomaliilor cantitative (cresterea sau scaderea procentuala a unor fractiuni sau aparitia unor benzi aditionale) si calitative
- obtinerea modeleleor electroforetice care sa sugereze sau confirme diagnosticul
- identificarea precoce a modificarilor biochimice caracteristice unor afectiuni, deci diagnosticul precoce
Electroforeza proteinelor serice constituie punctul de plecare in investigatia biochimica a oricarei zone de patologie, fiind singura analiza biochimica ce patrunde in intimitatea mecanismelor etiologice ale diferitelor afectiuni. Ea poate evidentia diferite zone de patologie si poate orienta spre alte investigatii suplimentare.
Unul dintre avantajele majore este acela ca electroforeza este putin influentata de factorii de care depind atat de mult celelalte determinari biochimice: temperatura mediului ambuiant, pozitia corpului, efortul fizic, dieta, medicatia pacientului. Valoarea procentuala a diferitelor fractiuni nu prezinta variariatii diurne, rezulatatele ramanand nemodificate un timp mai indelungat.
In interpretarea rezultatelor trebuie sa se tina seama de:
- culoarea si aspectul serului
- concentratia proteinelor totale
- varsta pacientului (frecventa benzilor monoclonale creste dupa 45 ani)
- rezultatele altor determinari de laborator si simptomatologia
Notiuni generale despre tehnicile electroforetice utilizate in laboratorul clinic
Electroforeza este o tehnica fizico-chimica de analiza ce permite separarea proteinelor pe baza diferentei dintre vitezele de deplasare in camp electric. Ca urmare a caracterului amfoter, proteinele poseda o sarcina electrica ce depinde de natura moleculei, pH si compozitia mediului si vor migra in camp electric catre electrodul de polaritate opusa.
In prezent, in laboratorul clinic, se utilizeaza doua tipuri de tehnici electroforetice:
- electroforeza in gel de agaroza (electroforeza pe suport solid)
- electroforeza capilara (in mediu lichid)
Electroforeza in gel de agaroza prezinta avantajul unei bune rezolutii, specificitati si sensibilitati, automatizarii complete si a unei game largi de parametrii ce pot fi analizati.
Gelul de agaroza pastreaza integritatea structurala a proteinelor (este un mediu nedenaturant), iar transparenta sa permite extinderii gamei de analize si la alti parametri ce necesita tehnici de colorare speciala (lipide, izoenzime).
Electroforeza capilara este o metoda moderna introdusa din 1980 in cercetarea stiintifica si din 2001 in investigatia de laborator. Prezinta numeroase avantaje: separare rapida, excelenta rezolutie si reproductibilitate, automatizare completa, dar prezinta dezavantajul numarului mic de parametri ce pot fi analizati (proteine serice si urinare, imunofixare, hemoglobine, transferina).
Automate de electroforeza SEBIA
- electroforeza in gel de agaroza: Hydrasys 2, Assist, Gelscan (densitometru)
- electroforeza capilara: Capillarys 2, Cappilarys Neonat Fast, Capillarys Flex Piercing, Minicap
Performante (nr.probe/h)
|
Parametru
|
Capillarys 2
|
Minicap
|
Hydrasys 2
|
|
Proteine serice
|
78/h
|
19/h
|
60/h*
|
|
Proteine urinare
|
53/h
|
|
10/h*
|
|
Imunofixare
|
8/h
|
2/h
|
8/h*
|
|
Hemoglobina
|
33/h
|
9/h
|
15/h*
|
|
Neonat
|
24/h
|
|
|
|
Fast neonat
|
48/h
|
|
|
|
CDT (Transferina)
|
38/h
|
10/h
|
|
|
High resolution
|
53/h
|
|
60/h*
|
|
Lipide
|
|
|
15/h*
|
|
Izoenzime
|
|
|
15/h*
|
*Numarul de probe lucrate pe ora depinde de capacitatea gelului (variante disponibile: 2,4,7,15, 30 probe functie de parametru)
Afectiuni care se pot diagnostica prin tehnici electroforetice SEBIA
|
Parametru
|
Kit
|
Afectiuni
|
|
Proteine serice
|
Hydragel Protein
Capillarys/Minicap
|
Inflamatii, afectiuni hepatice, renale, cardiovasculare, gamapatii momoclonale, reumatism, parazitoze
|
|
Imunofixare
|
Hydragel IF
Capillarys/Minicap IT
|
Gamapatii monoclonale
Boli autoimune
|
|
Hemoglobina
|
Hydragel Hemoglobine
Capillarys/Minicap Hemoglobine
|
Talasemii, anemii, drepanocitoza, anomalii calitative ale hemoglobinei
|
|
CDT (transferina deficienta in carbohidrati)
|
Capillarys, minicap CDT
|
Consum cronic de alcool
|
|
Lipoproteine
|
Hydragel Lipo + Lp(a)
|
Dislipidemii
|
|
Hemoglobina glicozilata Hb A1c
|
Hydragel Hb A1c
|
Diabet
|
|
Benzi oligoclonale in LCR
|
Hydragel CSF |
Scleroza multipla
|
|
CK (creatin kinaza)
|
Hydragel Iso CK
|
Infarct miocardic (CK MB crescut)
|
|
LDH (lactat dehidrogenaza)
|
Hydragel Iso LDH
|
Infarct miocardic (LDH1>LDH2)
Distrofie musculara Duchenne
|
|
PAL (fosfataza alcalina)
|
Hydragel Iso PAL
|
Sarcom, mielom multiplu
|
|
Proteine urinare
|
Hydragel Proteinurie
Minicap
|
Afectiuni renale
Gamapatii monoclonale
|
|
Paraziti, fungi (Ag, Ac)
|
Hydragel IEP Plus
|
Malarie, giardioza, candidoza
|
Deci, ce alegem: electroforeza in gel sau electroforeza capilara?
Intrucat ambele metode sunt extrem de moderne, complet automatizate, cu sensibilitate si specificitate mari si foarte rapide, alegerea trebuie facuta tinand cont de:
- capacitatea laboratorului (Minicap pentru laboratoare cu numar mic de analize/zi, Caillarys si Hydrasys pentru laboratoare de mare capacitate)
- gama de parametri ce se doresc a fi analizati (Minicap si Capillarys pentru gama restransa: proteine serice si urinare, hemoglobina, CDT, Hydrasys pentru gama larga: proteine serice, urinare, lipoproteine, hemoglobine, izoenzime, alte lichide biologice)
Referinte bibliografice:
A.Chiva- Investigatia electroforetica in diagnosticul de laborator- ghid de interpretare, Editura Universitara 'Carol Davila", Bucuresti, 2008.