ELECTROFOREZA PROTEINELOR URINARE
Se realizeaza in doua variante:
- Electroforeza de inalta rezolutie - cand se urmareste studiul calitativ al proteinuriei (mai putin utilizata)
- Electroforeza in gel de SDS-agaroza - cand se urmareste determinarea cantitativa a diferitelor fractiuni si tipizarea proteinuriei (glomerulara, tubulara, mixta)
Electroforeza de inalta rezolutie a proteinelor urinare
Electroforeza de inalta rezolutie e proteinelor serice se efectueaza numai in scopul evidentierii unui component monoclonal. Orice banda monoclonala prezenta in zona de mobilitate gama, alfa-1, alfa-2 sau beta trebuie confirmata prin imunofixare
In functie de rezultat, electroforeza de inalta rezolutie a proteinelor urinare trebuie insotita de teste complementare (determinari nefelometrice ale unor fractiuni de interes si electroforeza proteinelor urinare in gel de SDS-agaroza) pentru caracterizarea tipului de proteinurie (tubulara, glomerulara sau mixta) si determinarea cantitativa a lanturilor usoare libere si/sau legate
Colorantul utilizat (violetul acid) este unul cu afinitate mare pentru fractiunile slab prezentate, in special Ig G monoclonale sau lanturi usoare libere, raspunzand in mare parte necesitatilor clinice
Electroforeza proteinelor urinare in fel de SDS-agaroza
Gelul de SDS-agaroza permite separarea proteinelor urinare pe baza masei moleculare, fara prealabila concentrare a urinii. Utilizarea violetului acid drept colorant confera sensibilitate si specificitate metodei datorita afinitatii mari pentru proteinele de concentratie mica. Pragul de detectie per fractie este de 15mg/l
De la linia de start, in ordinea mobilitatii lor electroforetice deosebim:
- Proteine de origine glomerulara (GM > 70 kDa)
- alfa-2 macroglobulina
- IgM
- haptoglobina
- IgA
- IgG
- transferina
- Albumina
- Proteine de origine tubulara (GM < 70 kDa)
- dimeri de lanturi usoare
- alfa-1 microproteina
- lanturi usoare libere
- RBP (retinol binding protein)
- lizozim
- beta-2 microglobulina
MODIFICARI EVIDENTIATE LA ELECTROFOREZA PROTEINELOR URINARE
Proteinuria fiziologica
Este o proteinurie minima, in general mai mica de 120mg / 24h, fara o diferenta semnificativa intre sexe cu largi variatii fiziologice de la o zi la alta.
Electroforeza releva prezenta albuminei ca proteina majoritara, a transferinei si a imunoglobulinelor.
Acest tip de proteinurie apare in:
- efort (la sportivii cu activitate fizica intensa, frecvent asociata cu microhematurie si prezenta cilindrilor)
- ortostatism (indeosebi la pubertate)
- febra
- la varstnici
- post prandial (dupa ingestia oricarui aliment sau, dimpotriva, a anumitor alimente)
- stres sau expunere la frig
Proteinuria patologica
Proteinuria patologica depaseste 125mg / 24h putand fi de doua feluri:
Proteinuria intermitenta este in general, moderata, fara suspiciunea unei afectari renale sau instituirea unui tratament sau diete.
Proteinuria permanenta poate fi:
- proteinurie renala:
- tubulara
- glomerulara
- mixta
- proteinurie pre-renala
- proteinurie post renala
- microalbuminurie
Proteinuria glomerulara
In general depaseste 1 g/l si se caracterizeaza prin prezenta albuminei ca fractiune majoritara si a proteinelor cu masa moleculara mai mare de 65-70 kDa (transferina, Ig G) situate intre albumina si punctul de aplicare a probelor.
Proteina glomerulara poate fi:
- selectiva cu prezenta de albumina, transferina si urme de imunoglobuline
- neselectiva cu prezenta tuturor proteinelor serice, mai putin cele cu greutate moleculara mare cum ar fi lipoproteinele, IgM, alfa-2 macroglobulina
- partial selectiva cu depistarea unor fractii intermediare
Apare in:
- glomeruloscleroza
- glomerulopatie membranoasa
- glomerulopatie proliferativa
- sindrom nefrotic
- amiloidoza
- nefroza lipoidica
- unele afectiuni genetice
- intoxicatii cu metale grele
- neoplazii
- medicamente
Proteinuria tubulara
Este moderata cantitativ, fiind mai mica de la 1 g/l si se caracterizeaza prin continut scazut de albumina (< 25% din totalul proteinuriei) si proteine cu masa moleculara mai mica de 65-70 kDa (alfa-1 microglobulina, beta-2 microglobulina, lanturi usoare libere, RBP-retinol binding protein, lizozim) situate intre albumina si extremitatea anodica a gelului. Importanta deosebita prezinta lanturile usoare libere (25 kDa) si/sau legate (50 kDa), alfa-1 microglobulina, beta-2 microglobulina.
Apare in:
- intoxicatii cu unele metale grele: cadmiu, zinc, plumb, mercur, aur
- pielonefrita acuta sau cronica
- rejectia transplantului renal
- sindrom Fanconi
- amiloidoza
- boala Wilson
- sarcoidoza
- cistinoza metabolica congenitala
- acidoza tubulara
Proteinuria mixta
Este importanta cantitativ, fiind mai mare de 1 g/24 ore. Se caracterizeaza prin prezenta atat a proteinelor tubulare, cat si a celor glomerulare si este asociata frecvent cu insuficienta renala.
Apare in:
- necroza tubulara, ca rezultat al glomerulonefritei cronice
- pielonefrita (cu leziuni ale parenchimului renal)
- tromboza de vena renala
Microalbuminuria desemneaza cresterea excretiei de albumina (nedectabila pe stripurile urinare) la valori de 30-300 mg/24h. Apare in cazul diabetului zaharat, in general de tip II, cand constituie un indicator precoce al leziunii renale instalate inainte ca testele de apreciere a functiei renale (clearance-ul la creatinina) sa se modifice. Prezenta microalbuminuriei se coreleaza cu riscul de afectare coronariana.