ELECTROFOREZA HEMOGLOBINEI


Electroforeza hemoglobinei in mediul alcalin


        Acest tip de electroforeza permite separarea si cuantificarea hemoglobinelor normale (Hb A, Hb F si Hb A2) si identificarea principalelor hemoglobine patologice de interes medical si antropologic: HbS, HbD, Hb C si HbE. Analiza se efectueaza pe un hemolizat de globule rosii spalate in prealabil cu ser fiziologic. Separarea electroforetica se face pe baza sarcinii electrice si a marimii moleculare, in gel de agaroza la pH alcalin 8.5. Fractiunile sunt evidentiate prin colorare cu amidoschwartz si cuantificate prin densitometrare la 570 nm.

        Electroforeza hemoglobinei in mediul alcalin este recomandata pentru studiul:

  • Anomaliilor calitative (hemoglobinopatii) pentru identificarea hemoglobinelor patologice Hb S, Hb C, Hb E si Hb D.
  • Anomaliilor cantitative pentru diagnosticul alfa si beta talasemiilor.

Electroforeza hemoglobinei in mediul acid


        Electroforeza in mediul acid serveste la identificarea variantelor de hemoglobina determinate in prealabil pe geluri alcaline si la diferentierea hemoglobinei normal Hb A de hemoglobinele patologice Hb S, Hb C si Hb F. Analiza se efectueaza pe un hemolizat de globule rosii spalate in prealabil cu ser fiziologic. Hemoglobinele sunt separate in gel de agaroza la pH acid 6.0. Fractiunile sunt evidentiate prin colorare cu amidoschwartz prin densitometrare la 570 nm.

Profilul electroforetic normal evidentiaza, de la anod la catod, urmatoarele fractiuni:

  • Hb A0, fractiunea majoritara, ce corespunde Hb A0 si Hb A2 Hb A1 a+b+c (fractiunile neglicolizate ale Hb A adulte).
  • Hb A1, fractiune minoritara, ce corespunde fractiunii glicolizate a Hb A.

Variatii patologice

Profilul electroforetic evidentiaza in cazul prezentei hemoglobinelor anormale urmatoarele fractiuni, de la anod la catod:

  • Hb C - migreaza lent si se gaseste in spatele liniei de start.
  • Hb S - ramane in linia de start.
  • Hb D, E, A - migreaza grupat
  • Hb F si A - migreaza grupat

DETERMINAREA ELECTROFORETICA A HEMOGLOBINEI GLICOZILATE


        Separarea electroforetica a Hb A1c se face in gel de agaroza, la pH acid 5.9 si depinde de afinitatea diverselor hemoglobine pentru gel si de sarcina lor. Dupa uscare, electroforegramele sunt densitometrate fara colorare, la 420 nm, lungimea de unda la care absoarbe hemoglobina. Metoda de determinare electroforetica prezinta unele avantaje, cum ar fi:

  • valoarea Hb A1c nu depinde de concentratia totala de hemoglobin
  • metodele electroforetice permit separarea Hb F si a celor cu punct izoelectric scazut, hemoglobine ce pot interfera cu glicohemoglobinele in alte metode
  • tehnica de determinare electroforetica a Hb A1c ofera informatii si asupra eventualelor hemoglobinopatii

Rolul cuantificarii hemoglobinei glicozilate in monitorizarea tratamentului diabetului zaharat

  • Deoarece ea reflecta fidel concentratia medie a glucozei sanguine pe o perioada anterioara destul de intinsa (4-8 saptamani), cuantificarea ei poate constitui un test screening, oferind chiar posibilitatea precizarii, in anumite limite, a debutului diabetului
  • Deoarece revenirea la normal a Hb glicozilate necesita un interval de cateva sǎptamani, determinarea ei constituie un test excelent de verificare a respectarii riguroase a tratamentului (in comparatie cu glicemia care se poate normaliza in cateva zile)

        Valorile normale sunt cuprinse, in general intre 4- 6 %. Valorile sub 6 % sunt considerate normale, cele ce depasesc 6% ridicand suspiciunea de diabet. Pragul de 6% este impus de recomandarile internationale si de sistemul de standardizare NGSP/ DCCT (National Glycohemoglobin Standardization Program/Diabete Control and Complication Trial).

Un hemolizat normal prezinta trei fractiuni:

  • cea mai catodica corespunde hemoglobinelor glicozilate intr-o proportie mai mica: HbA1a si HbA1b
  • fractia intermediara corespunde HbA1c
  • cea mai anodica fractie contine HbA0 si HbA2

Noutati


























Actualitati Medicale




















 

Introdu adresa ta de email pentru a te alatura noua.

 
Proiect realizat de AB T&Co              © Toate drepturile rezervate Electroforeza.ro 2009